Departamento de Anatomia e Embriologia, Faculdade de Medicina, Yasuj University of MedicalScience, Yasuj, (Irã) * Departamento de Anatomia e Embriologia, Faculdade de Medicina, Teerã, Universidade de Ciências Médicas, Teerã, (Irã) *** Departamento de Fisiologia Médica escola, Yasuj Universidade de Ciência Médica, Yasuj, (Irã). **** Departamento de Anatomia e Embriologia, Faculdade de Medicina, Hamadan Universidade de MedicalScience, Hamadan, (Irã).
Endereço para correspondência :
Iraj Amiri, Ph.D em Anatomia, Instituto de Anatomia e Embriologia do Instituto, Faculdade de Medicina, Universidade Hamadan de Ciência Médica, Hamadan, (Irã) E-mail: amiri44@yahoo.com, TEL: + 98-912-336- 2561 Fax: + 98-811-8276299
Abstrato
Contexto: O armazenamento de oócitos é importante para os avanços na biologia reprodutiva e no tratamento da infertilidade. Embora tenham sido relatados procedimentos bem-sucedidos para a criopreservação de oócitos humanos da metáfase II, seus resultados mostraram-se insatisfatórios e parecem exigir maior progresso. O fuso microtubular dos oócitos MII é sensível a mudanças de temperatura. Oócitos em estágio de vesícula germinativa (GV) não possuem fuso microtubular, portanto, sua criopreservação pode ser uma abordagem alternativa para o armazenamento de gametas.
Objetivos: examinar a viabilidade e subsequente capacidade de desenvolvimento de oócitos GV murinos após vitrificação.
Cenário: Centro de pesquisa em embriologia em uma instituição acadêmica.
Design: Artigo Original
Métodos e Materiais:Oócitos de vesículas germinais com células do cumulus foram transferidos para a solução de vitrificação, que foi composta por 30% (v / v) de etilenoglicol, 18% (p / v) de Ficoll-70 e 0,3 M de sacarose, por etapa única ou em etapas. maneira sábia. Após vitrificação e armazenamento em azoto líquido, os oócitos foram descongelados e lavados duas vezes em meio TCM199 e depois submetidos a maturação, fertilização e cultura in vitro.
Resultados: As taxas de sobrevivência de ovócitos, maturação para MII, fertilização e desenvolvimento em exposição por etapas foram significativamente maiores (P <0,05) quando comparadas às taxas correspondentes no procedimento de passo único. Os dados coletados foram analisados pelo teste one-way ANOVA.
Conclusão:Os resultados do presente estudo indicam que os oócitos do estágio GV apresentam melhor morfologia e viabilidade após a vitrificação no método stepwise; e suas taxas de maturação e desenvolvimento para o estágio de 2 células também são maiores em comparação com oócitos criopreservados por meio de procedimento de passo único.
Palavras-chave
Criopreservação de Oócitos, Oócito de Vesícula Germinativa, Vitrificação, Microtúbulo.
Como citar este artigo:
Mahmoudi R, Ragardi Kashani **, Abbasi M **, Amidi F **, Sobhani A **, Abolhasani F **, e outros .. MATURAÇÃO IN VITRO E CAPACIDADE DE ADUBAÇÃO DO OÓCITO DE FASE GV DO MOUSE A SEGUIR VITRIFICAÇÃO POR STEPWISE. Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2008 dezembro [citado: 2018 16 de agosto]; 2: 1234-1239. Disponível em
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2008&month=December&volume=2&issue=6&page=1234-1239&id=368
Introdução A
criopreservação de gâmetas e embriões humanos tornou-se parte integrante da reprodução assistida. Os principais desenvolvimentos na tecnologia de criopreservação refletiram a rápida expansão da tecnologia reprodutiva nas últimas duas décadas. Agora é possível criopreservar espermatozóides, oócitos e embriões em seus vários estágios de desenvolvimento (1) . Existem dois métodos de criopreservação celular, criopreservação lenta e vitrificação. Muitos tipos de células podem ser criopreservados com sucesso por criopreservação lenta, mas alguns tipos de células não podem ser criopreservados por métodos de equilíbrio lentos, ou resultam em sobrevivência pobre.
As razões mais comuns para a falha são a alta sensibilidade a temperaturas extremas, a incapacidade de manter um estado de super-resfriamento intracelular e a interrupção de interações célula-célula complexas pelo gelo extracelular. Um tipo de célula importante que foi encontrado difícil de criopreservar por congelação lenta, é o oócito de mamífero. Alta sensibilidade generalizada a extremos de temperatura é uma das razões. Outra razão importante é que os oócitos maduros estão presos na metáfase da Meiose II; ou seja, os cromossomos estão dispostos no fuso meiótico. O fuso é composto de material de microtubulina e, como os microtúbulos em geral, torna-se desagregado ao ser resfriado a temperaturas em torno de 0 ° C (2) , (3) , (4) , (5) .
No caso de células e tipos de tecidos onde o congelamento lento de equilíbrio produz resultados inferiores, esforços crescentes estão sendo feitos para alcançar a criopreservação por procedimentos de vitrificação. A vitrificação tem sido usada com sucesso para armazenamento de oócitos maduros (estágio de metáfase II) (6) , (7) , (8) , (9) , (10) . Mas os dados sobre vitrificação de oócitos em estágio de vesícula germinativa (VG) são limitados, embora esse modo de criopreservação possa ser promissor (11) , (12)Até o estágio dos oócitos da vesícula germinal (GV) não formaram fusos, o que representa problemas significativos na criopreservação bem sucedida de oócitos. Nesse estágio, os cromossomos são descondensados e encerrados dentro da membrana nuclear, potencialmente tornando-os mais resilientes ao resfriamento no treino.
Regimes para coleta de oócitos humanos em estágio GV já desenvolvidos foram desenvolvidos e envolvem modificação de técnicas de coleta de oócitos maduros (13) e redução da estimulação hormonal. Estudos mostraram que oócitos em estágio GV, que são despojados de células do cumulus, têm uma capacidade de desenvolvimento reduzida, comparada com a dos oócitos em estágio GV cercados de cumulus (14).. Células do cumulus desempenhar um papel importante na maturação do oócito, uma vez que proporcionam e transferir vários fatores conhecidos e desconhecidos que são essenciais na regulação da progressão da meiose, nuclear normal e maturação citoplasmática de oócitos e subsequente desenvolvimento embrionário após a fertilização (15) , (16) , (17) , (18) . O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos da exposição stepwise e single step ao crioprotetor na capacidade de desenvolvimento do oócito vitrificado de camundongo em etilenoglicol-sacarose na presença de células do cumulus.