Organização
O consentimento ético foi fornecido pelo Comitê de Ética Local da Faculdade de Medicina da Universidade de Firat. O consentimento informado foi obtido de todos os participantes do estudo. Um total de 40 pacientes (29 homens e 11 mulheres) de hanseníase lepromatosa com idade média de 60,00 ± 14,43 e anos médios de diagnóstico de 30,66 ± 17,42 foram incluídos. Quarenta indivíduos saudáveis (25 homens e 15 mulheres) que não têm contato com a hanseníase e idade média de 55,00 ± 8,89 foram incluídos como controles. Todos os pacientes incluídos neste estudo estavam livres de outras doenças infecciosas. Aqueles pós-diagnóstico receberam poliquimioterapia (PQT) de acordo com as recomendações da Organização Mundial da Saúde. Pacientes submetidos a um episódio de eritema nodoso da hanseníase e aqueles que tomavam talidomida ou corticóides foram excluídos.
Análise citométrica de fluxo de sangue periférico:Sangue venoso (2 mililitros) dos participantes foi levado para dentro dos tubos com EDTA para examinar receptores de células T por citometria de fluxo. Todas as amostras de sangue foram pesquisadas dentro de 2 horas. As amostras de sangue periférico foram analisadas na Coulter EPICS XL-MCL (Beckman Coulter USA). Foram utilizados anticorpos monoclonais da Immunotech (Marselha, França). A expressão na superfície celular de antigénios de linfócitos foi examinada por coloração com mAb de amostras de sangue periférico com citometria de fluxo de duas cores. Os tubos de CD4 0 / CD14, isotipo de controlo, CD3, CD19 / CD5, CD20 mAb foram preparados e analisados de acordo com as instruções do fabricante. Os resultados foram contados no mesmo equipamento usando o software de análise Expo-32.
A análise estatística foi feita usando o SPSS 11.0 e o teste T da amostra relacionada. Para o limiar de significância estatística, foi utilizado o valor de p <0,05.
Resultados
A idade média dos pacientes com lepra lepromatosa foi de 60 ± 14 anos (variação de 25 a 80), do grupo controle saudável foi de 59 ± 9 anos (variação de 34 a 79). A duração média da doença foi de 29 ± 17 anos em paciente com lepra lepromatosa. (Tabela / Fig. 1) : Características demográficas e valores laboratoriais de pacientes com hanseníase virchowiana e controles Os linfócitos CD19 + CD5 + B1 foram significativamente maiores em pacientes com hanseníase lepromatosa do que em controles saudáveis (p = 0,001). Os linfócitos CD19 + CD5-B foram significativamente maiores em pacientes com lepra lepromatosa em comparação com controles saudáveis (p <0,05) (Tabela / Fig. 1) , (Tabela / Fig. 2) , (Tabela / Fig. 3) .
Houve uma correlação significativa entre os linfócitos B totais de linfócitos B CD19 + B) e linfócitos CD19 + CD5 + B1 (r = 0,54), mas não houve correlação significativa entre a porcentagem de linfócitos CD19 e CD19 + CD5 + B1 e a duração da doença.
Discussão
A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae. Seu amplo espectro de manifestações depende de diferentes subconjuntos de células T sensíveis ao M. leprae. As células T auxiliares tipo 1 (Th1) estão associadas à hanseníase tuberculóide (TT), que é caracterizada por uma resposta protetora contra o bacilo, com controle efetivo da disseminação da doença. Em contraste, as células T helper 2 (Th2) estão principalmente associadas à lepra lepromatosa (LL), que é caracterizada por intensa ativação policlonal de linfócitos B e ausência de resposta de células T específicas para M. Leprae, resultando em doença multibacilar e disseminada, bem como o desenvolvimento de hipergamaglobulinemia e auto-anticorpos. Entre esses extremos estão pacientes imunologicamente instáveis, com sinais e sintomas intermediários correspondendo à tuberculóide borderline (BT),2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 .
Embora as células CD5 + B1 sejam responsáveis por uma pequena porcentagem de células B em indivíduos adultos saudáveis, seu estudo ganha importância devido ao seu envolvimento em estados autoimunes, na recuperação linfóide inicial após transplante de medula óssea e em neoplasias malignas, como o CLL e linfoma de células do manto (3) . Estudos adicionais também mostraram que células normais CD5 + B podem ser expandidas em doenças autoimunes, como artrite reumatoide (AR) ou síndrome de Sjögren (SS) primária (13) , (14). Ambos os linfócitos CD5 + e CD5-B esplênicos produzem autoanticorpos específicos de GP de plaquetas na púrpura trombocitopênica idiopática crônica (PTI) e podem desempenhar um papel na patogênese autoimune da PTI (5) . Pacientes que tomaram hidrolisada leprosos com hanseníase apresentam um defeito na resposta celular do tipo Th1. Sabe-se que pacientes com hanseníase apresentam alto risco de doença autoimune do que população saudável. Em comparação com os controles saudáveis, tanto os linfócitos B CD5 convencionais quanto os subgrupos de células CD5 + B1 foram encontrados em pacientes com hanseníase. Aumentos significativos observados nos subgrupos de células CD19 + CD5 e CD19 + CD5 + B1 em pacientes com lepra lepromatosa sugerem que os linfócitos B1 com predisposição conhecida à autoimunidade podem ter um papel na resposta imune protetora desorganizada na hanseníase lepromatosa.
Cerca de 33% das células B no sangue periférico dos doentes com lepra lepromatosa expressaram marcadores para características autorreativas enquanto menos de 12% das células B em circulação no grupo saudável exibiram esses marcadores. Os pacientes com lepra lepromatosa continham um número substancial de células B, das quais cerca de 30% demonstraram características autorreativas.