O enxerto de membrana amniótica (AMG) está sendo avaliado como adjuvante na trabeculectomia, tendo em vista seu potencial para superar a fibrose subconjuntival, que é a principal causa de insucesso da cirurgia de fistulização do glaucoma (1) . A trabeculectomia é uma cirurgia de rotina em pacientes com glaucoma em que uma peça de malha trabecular no ângulo da câmara anterior é removida e o humor aquoso do olho é drenado para o espaço subconjuntival. Isso é especialmente verdadeiro no manejo clínico do glaucoma refratário, em que a taxa de sucesso com modalidades alternativas, como agentes antifibróticos, implantes de drenagem e procedimentos ciclodestrutivos controlados, tem sido modesta. Além disso, algumas complicações que se identificaram com esses procedimentos levaram a repensar seu uso generalizado
O presente estudo visa abordar o papel do AMG no aumento da trabeculectomia no olho de coelho. Este modelo animal foi escolhido por sua resposta muito rápida de cicatrização após trabeculectomia, que se aproxima muito do olho humano com glaucoma refratário em relação a um alto risco de falha da trabeculectomia (2) .
Material e métodos
Este estudo experimental em olhos de coelho foi realizado no Departamento de Farmacologia Ocular em colaboração com os serviços de glaucoma do nosso Centro entre março de 2000 e junho de 2002. A certificação foi obtida do comitê de ética do Instituto de Ciências Médicas da Índia, Delhi, Índia. O estudo foi concebido de modo a cumprir a Declaração de Helsinki de 1975 e as diretrizes para o tratamento ético de animais emitidas pelo Governo da Índia.
Dezesseis olhos de oito coelhos pigmentados foram divididos aleatoriamente em dois grupos. Um olho de cada coelho foi aleatoriamente designado para o grupo de estudo, onde a trabeculectomia com AMG foi realizada, e o outro olho para o grupo de controle, onde apenas a trabeculectomia foi realizada.
Todos os coelhos foram anestesiados com 20 mg / ml de pentobarbital de sódio intravenoso a uma dose de 35-40 mg / kg. O nível de anestesia foi monitorado pelo reflexo de piscada e reflexo de retirada do dedo. Uma PIO basal foi medida com o tonômetro de Schiotz em ambos os olhos. A média de 3 leituras foram tomadas. Ambos os olhos foram operados na mesma sessão, com o olho direito sendo operado primeiro. Usando uma abordagem superior, uma sutura de tração de poliglactina 8-0 foi passada através do estroma corneano. A conjuntiva e a cápsula de Tenon foram dissecadas como uma única camada para formar um retalho baseado no limbo. Um retalho escleral de espessura parcial de 3 × 3 mm foi elevado e dissecado em direção ao limbo. Em seguida, uma tira de membrana amniótica de 2 × 6 mm foi suturada ao leito escleral com sutura contínua de poliglactina 8-0 (Vicryl), mantendo a superfície mesenquimal em contato com a esclera. O máximo cuidado foi tomado para evitar a obstrução do local da esclerotomia proposta com a borda anterior do enxerto. Uma esclerotomia interna de espessura total de 1 × 3 mm foi feita e uma iridectomia periférica foi realizada. O retalho escleral foi suturado sobre o enxerto nos cantos com fio mononáilon 10-0 (MFN) e a conjuntiva fechada com poliglactina 8-0. A câmara anterior foi formada com solução salina balanceada. O olho contralateral foi submetido a trabeculectomia convencional sem AMG, com técnica semelhante. Em ambos os grupos, a redução da PIO e a formação da bolha foram confirmadas no intraoperatório. Todas as cirurgias foram realizadas pelo mesmo cirurgião (SK). O retalho escleral foi suturado sobre o enxerto nos cantos com fio mononáilon 10-0 (MFN) e a conjuntiva fechada com poliglactina 8-0. A câmara anterior foi formada com solução salina balanceada. O olho contralateral foi submetido a trabeculectomia convencional sem AMG, com técnica semelhante. Em ambos os grupos, a redução da PIO e a formação da bolha foram confirmadas no intraoperatório. Todas as cirurgias foram realizadas pelo mesmo cirurgião (SK). O retalho escleral foi suturado sobre o enxerto nos cantos com fio mononáilon 10-0 (MFN) e a conjuntiva fechada com poliglactina 8-0. A câmara anterior foi formada com solução salina balanceada. O olho contralateral foi submetido a trabeculectomia convencional sem AMG, com técnica semelhante. Em ambos os grupos, a redução da PIO e a formação da bolha foram confirmadas no intraoperatório. Todas as cirurgias foram realizadas pelo mesmo cirurgião (SK).
O procedimento de aquisição, preparo e armazenamento da membrana amniótica humana já foi descrito anteriormente (3) . Resumidamente, a placenta foi obtida a partir de casos de cesariana eletiva. HIV, Hepatite B e C e sífilis foram descartados com testes apropriados. A solução salina balanceada de Erale foi usada para limpar a placenta de coágulos sob o capô de fluxo lamelar. O córion e o âmnio foram separados por dissecção romba. O âmnio foi então colocado em uma tira de papel de nitrocelulose com a superfície do embasamento epitelial para cima. Foi então cortado em tiras de 3 × 4 cm2 e armazenado a –80C em frasco estéril contendo meio de Eagle modificado por Dulbecco e glicerol na proporção de 1: 1.
No pós-operatório foram utilizados apenas dexametasona tópica a 0,1%, ciprofloxacina a 0,3% e tropicamida a 1%. O diclofenaco foi administrado por via intramuscular para alívio da dor. A PIO foi medida sob anestesia no dia 1, semana 1 e 1 mês após a cirurgia. Durante o acompanhamento, a avaliação diária da lâmpada de fenda (lâmpada de fenda manual) foi feita para a natureza da bolha, e seu tamanho foi medido com pinças do limbo.
Para o estudo patológico, os coelhos foram sacrificados com uma alta dose de pentobarbital sódico. Os olhos foram enucleados e foram realizadas biópsias de 1,5 mm de diâmetro da conjuntiva, tenons capsule e AMG, conforme aplicável, em três locais: longe da área da bolha, adjacente à área da bolha, e acima da área da bolha. Cada amostra de biópsia foi dividida em duas metades e transportada em formaldeído a 10%, metade para microscopia de luz e a outra metade para microscopia eletrônica. Para microscopia de luz, as seces de parafina foram cortadas e as seces de Hematoxilina e Eosina foram examinadas quanto ao crescimento de fibroblastos e culas epiteliais. Massons Trichrome