As hemoglobinopatias são os distúrbios monogênicos de sangue mais comumente encontrados, constituindo um importante problema genético e de saúde pública no Sudeste Asiático e no subcontinente indiano (1) . Das várias hemoglobinas anormais até agora identificadas (2) , existem três variantes - célula falciforme (Hb S), hemoglobina E (Hb E) e hemoglobina D (Hb D), predominantemente prevalentes na Índia. Existem variações regionais para essas variantes estruturais da hemoglobina; a freqüência de alelo cumulativo em diferentes partes da Índia para essas variantes foi de 5,35% (3) . Observou-se que a freqüência média do alelo da hemácia falciforme e da hemoglobina D é de 4,3% e 0,86%, respectivamente, com a hemoglobina E constituindo 10,9% na região nordeste da Índia (3).. A doença falciforme é amplamente disseminada em comunidades tribais e não tribais, especialmente na região centro-leste da Índia. Com uma faixa de prevalência de 3-17%, a β-talassemia é prevalente em toda a Índia (2) . Assim, as hemoglobinopatias são um enorme fardo genético e representam um grande desafio para a saúde na Índia.
A hemoglobina falciforme (Hb S) é uma variante estruturalmente anormal, com resíduo de ácido glutâmico substituído por valina na 6ª posição da cadeia polipeptídica da molécula β-globina. A hemoglobina E é outra variante estruturalmente anormal, com uma substituição do ácido glutâmico pela lisina na 26ª posição da cadeia polipeptídica da β-globina. A interação dessas hemoglobinas estruturalmente anormais (D, E, S) com a síntese interrompida da porção globina leva à combinação de duas anormalidades, resultando em dupla heterozigose da doença. Em vista da prática estrita de endogamia de castas e padrão de acasalamento não aleatório (consangüinidade), a β-talassemia é vista em associação com variantes estruturais da hemoglobina na Índia. No entanto, apenas alguns relatos sobre heterozigose dupla estão disponíveis na Índia (4) , (5), (6) , (7) , (8) .
Heterozigosidade dupla para hemoglobinopatias é uma entidade rara. Devido à escassez de literatura disponível sobre a ocorrência de heterose para hemoglobinopatias na Índia e as hemoglobinopatias como um importante problema genético e de saúde pública no estado de Orissa, o presente estudo foi realizado para avaliar os estudos familiares detalhados de casos de heterozigosidade dupla. falciforme e hemoglobina E com β-talassemia. Este estudo não só aumentará a compreensão prognóstica do fenômeno da heterose para hemoglobinopatias no estado, mas também será útil para aconselhamento genético, diagnóstico pré-natal e futuros estudos moleculares sobre o assunto na Índia.
Material e métodos
Este estudo prospectivo em família é baseado em nove casos-índice de beta-talassemia falciforme e em sete casos-índice de hemlassina-beta-talassemia. Eles foram selecionados de 1500 casos rotineiramente encaminhados, encaminhados para investigação da causa da anemia e suspeitos de estarem sofrendo de hemoglobinopatias antes da primeira transfusão de sangue, de diferentes Centros Primários de Saúde (UBS) periféricos e hospitais do estado de Orissa durante o período entre 2001 a abril de 2006. Detalhes de diagnóstico e análise dos casos de referência em Orissa já foram relatados em outros lugares (9) , (10). Todos os casos-índice mencionados acima e seus outros membros da família disponíveis, tais como pais, irmãos e irmãs, também foram submetidos a exame clínico e investigação da causa da anemia e aconselhamento genético / casamento após o consentimento informado. Ao todo, havia 30 sujeitos relacionados à talassemia β falciforme e 22 à talassemia E-β da hemoglobina. Informações básicas para cada família, como nome, idade, sexo, casta, lugar nativo, histórico reprodutivo, pedigree familiar e sinais e sintomas clínicos foram registrados.
Cerca de 2-3 ml. Amostras de sangue por via venosa foram coletadas com ácido etilenodiamino tetra acético (EDTA) como anticoagulante por seringas e agulhas descartáveis de cada indivíduo após a obtenção do consentimento informado. Todos os sinais e sintomas relacionados à hemoglobinopatia após o exame clínico foram registrados no pró-forma pré-projetado. Investigações laboratoriais foram realizadas seguindo os procedimentos padrão após verificação cruzada para controle de qualidade de tempos em tempos. Os parâmetros hematológicos foram estudados utilizando um contador de células sanguíneas automatizado (modelo MS4, Melet Schloesing Laboratories, Cergy-Pontoise Cedex, França).
O teste de falcização da dieta ceto foi realizado utilizando solução de metabissulfito de sódio recém-preparada como agente redutor para a presença ou ausência de hemoglobina falciforme (11).. A eletroforese de lisado de hemoglobina de rotina foi realizada em membrana de acetato de celulose (CAM) em tampão Tris-EDTA-Borato a pH 8,6 e a quantificação da fração A2 de hemoglobina de adulto foi realizada pelo método de eluição (12) . O valor superior a 3,5% da fração A2 da hemoglobina de adulto foi considerado como ponto de corte para a determinação do traço β-talassêmico.
Os indivíduos com o valor muito alto de hemoglobina A2, ou seja, mais de 10%, eram suspeitos de ter Hb A2 mais HbE, o que foi confirmado pela investigação de outros membros da família. A estimativa da hemoglobina fetal foi feita conforme descrito por Weatherall (12) .
O diagnóstico de β-talassemia falciforme foi baseado nos achados da hemoglobina (Hb) A, F, S / D e A2 na eletroforese em pH ácido e alcalino, níveis elevados de HbA2 (> 3,5%) e estudos familiares. Todas as amostras de sangue foram ainda submetidas à análise da variante da hemoglobina para detectar qualquer discrepância (feita para a Bio-Rad Diagnostics, Hercules California, EUA).