A utilidade e o potencial são explorados e discutidos. células de urina ou hemácias representam células ectodérmicas (células bucais), endodérmicas (células de urina) e mesodérmicas (células do sangue). Além disso, um grande número de células em interfase (aproximadamente algumas centenas) pode ser avaliado em curto período de tempo com FISH em interfase. Portanto, essa abordagem é o método mais apropriado para o estudo do mosaicismo. No entanto, o uso de esfregaços diretos é freqüentemente associado à hibridização deficiente devido a dificuldades na acessibilidade de sondas e fragmentos associados. O presente estudo destina-se a superar as dificuldades acima e, ao mesmo tempo, manter todos os benefícios dos esfregaços com as mais difíceis sondas FISH específicas de locus. A utilidade e o potencial são explorados e discutidos. um grande número de células em interfase (vizinhas, poucas centenas) pode ser avaliado em curto período de tempo com FISH em interfase. Portanto, essa abordagem é o método mais apropriado para o estudo do mosaicismo. No entanto, o uso de esfregaços diretos é freqüentemente associado à hibridização deficiente devido a dificuldades na acessibilidade de sondas e fragmentos associados. O presente estudo destina-se a superar as dificuldades acima e, ao mesmo tempo, manter todos os benefícios dos esfregaços com as mais difíceis sondas FISH específicas de locus. A utilidade e o potencial são explorados e discutidos. um grande número de células em interfase (vizinhas, poucas centenas) pode ser avaliado em curto período de tempo com FISH em interfase. Portanto, essa abordagem é o método mais apropriado para o estudo do mosaicismo. No entanto, o uso de esfregaços diretos é freqüentemente associado à hibridização deficiente devido a dificuldades na acessibilidade de sondas e fragmentos associados. O presente estudo destina-se a superar as dificuldades acima e, ao mesmo tempo, manter todos os benefícios dos esfregaços com as mais difíceis sondas FISH específicas de locus. A utilidade e o potencial são explorados e discutidos. O uso de esfregaços diretos é frequentemente associado à hibridização deficiente devido a dificuldades na acessibilidade de sondas e detritos associados. O presente estudo destina-se a superar as dificuldades acima e, ao mesmo tempo, manter todos os benefícios dos esfregaços com as mais difíceis sondas FISH específicas de locus. A utilidade e o potencial são explorados e discutidos. O uso de esfregaços diretos é frequentemente associado à hibridização deficiente devido a dificuldades na acessibilidade de sondas e detritos associados. O presente estudo destina-se a superar as dificuldades acima e, ao mesmo tempo, manter todos os benefícios dos esfregaços com as mais difíceis sondas FISH específicas de locus. A utilidade e o potencial são explorados e discutidos.
Material e métodos
Pacientes
Três crianças entre 9 e 12 anos com características de trissomia 21 e casos de trissomia pura citogeneticamente comprovados 21 foram selecionados do departamento de Genética Médica da SGPGIMS, Lucknow. Amostras de sangue venoso periférico de três machos citogeneticamente normais pareados foram incluídas para comparação. A citogenética foi realizada com bandagem de GTG de rotina e não houve anormalidades.
Amostra De Processamento De
Dedo De Sangue :
Cerca de 100 ul de sangue foram recolhidos com uma micropipeta para um tubo micro centrifugador de 1,5 ml contendo 400 ul de PBS (solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4, Sigma), bem misturados e centrifugados a 5000 rpm durante 5 minutos. O sobrenadante foi descartado e cerca de 500 ul de PBS foram adicionados, misturados e centrifugados. Este procedimento de lavagem foi repetido três vezes. Cerca de 400 ul de soluo hipotica foram adicionados ao sedimento, bem misturados e incubados durante 20 minutos em KCl 50mMol antes de adicionar 100 de fixador fresco (metanol e ido acico 3: 1) e depois centrifugados. O sobrenadante foi descartado e o fixador de 1000 ul foi adicionado ao sedimento celular, misturado e centrifugado. Este foi repetido três vezes antes de se dissolver em 50-100 ul de fixador fresco, dependendo do tamanho do sedimento celular. Aproximadamente 15-20ul de suspensão celular foi usado para a preparação da lâmina da mulher.
Lavar a boca :
Os pacientes foram solicitados a enxaguar a cavidade oral com água da torneira 2-3 vezes para minimizar a contaminação por partículas de alimentos e microorganismos antes de fornecer uma amostra de lavagem bucal em um tubo de plástico de 50 ml. O tubo foi centrifugado a 5000 rpm durante 5 minutos. O sedimento de células foi lavado 3 vezes em PBS e transferido para um tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Cerca de 1000 ul de soluo hipotica foram adicionados ao sedimento, bem misturados e incubados durante 20 minutos em 50mMol de KCl antes de adicionar 100 de fixador fresco (metanol e ido acico 3: 1) e depois centrifugados. O sobrenadante foi descartado e o fixador de 1000 ul foi adicionado ao sedimento celular, misturado e centrifugado. Isto foi repetido três vezes antes de se dissolver em 100-300 ul de fixador fresco, dependendo do tamanho do sedimento celular. Aproximadamente 15-20ul de suspensão celular foi usado para a preparação da lâmina.