O mosaicismo é uma condição comum entre pacientes com anomalia cromossômica, em particular, aneuploidia. Nosso estudo com as células acima indica que o FISH com as sondas do cromossomo 21/1/18 é suficiente para detectar células monossômicas constituindo> 10% da população celular total ou células trissômicas constituindo> 5% da população celular total. No entanto, o baixo nível de mosaicismo (<10%) não pode ser diagnosticado com confiança, particularmente com as células da urina. As células bucais são derivadas do ectoderma. As células da urina são principalmente derivadas do endoderma, enquanto as células do sangue são do mesoderma. A interfase FISH usando essas células é apropriada para detectar mosaicismo específico de tecido porque a extensão do mosaicismo é conhecida por variar significativamente entre diferentes tecidos. A síndrome de Pallister-Killian (SPK), um distúrbio raro nas mulheres, é caracterizada por um mosaicismo tecido-limitado ou tecido específico. A anormalidade cromossômica característica associada à PKS é i (12p), que é observada predominantemente em culturas de fibroblastos da pele. O diagnóstico de i (12p) em esfregaços bucais mostrou-se um método fácil e viável(13) .
A mudança no número de cromossomos (aneuploidia) tem sido consistentemente ligada a muitos distúrbios genéticos, incluindo o câncer. Como 90% dos cânceres surgem no tecido epitelial, o que é difícil de cultivar, técnicas que medem a aneuploidia nesses tecidos, isto é, FISH, seriam muito úteis. Aqui este estudo sugere que o FISH pode ser usado para detectar aneuploidia em células epiteliais esfoliadas coletadas da boca (bucal) e da bexiga (urina). Uma vez que as aberrações cromossômicas estão envolvidas mesmo em condições pré-cancerígenas, FISH em células bucais de betel quid mastigadores pode ser usado para triagem (14) . Da mesma forma, isso pode ser estendido para monitorar a exposição a agentes genotóxicos, incluindo o efeito de drogas hiperestimuladoras em células foliculares ovarianas. Recentemente, Madon et al. (15)relatou a viabilidade do uso de células do cumulus (células da granulosa) obtidas através de captação do óvulo para estudo de aneuploidia por FISH interfase.
Existem algumas desvantagens no FISH interfásico. Não encontramos o número esperado de sinais em todos os tipos de células semelhantes a Jenkins et al (16) . Muitos fatores podem ser atribuídos a isso, incluindo a captação de sonda através da membrana celular, particularmente com células bucais (células escamosas). Harris et al (5)usaram esfregaços bucais de trissomia 21 casos por FISH interfásica. Eles relataram uma eficiência de sonda de 71%. Neste estudo, a eficiência da sonda foi superior a 90% para a sonda específica do locus, que é mais difícil de hibridizar. Essa diferença pode ser devido ao uso de esfregaços onde a liberação de núcleos e o efeito hipotônico são difíceis. A digestão de proteínas com pepsina em nosso estudo mostrou-se eficiente na remoção da membrana celular queratinizada e na otimização da penetração da sonda. Uma digestão de 30 min com 300 microgramas / ml de pepsina em penetração otimizada de HCl 0,01 M em sonda de células bucais
Conclusão
Em conclusão, a interfase FISH no sangue, na cavidade bucal e na urina é um método rápido, eficaz e não invasivo para o diagnóstico de aberrações cromossômicas. Este teste é muito específico e confiável quando usado com forte suspeita clínica. Nos casos em que o resultado FISH é consistente com o fenótipo, não são necessários mais estudos. No entanto, um acompanhamento com análise cromossômica completa deve ser recomendado para comparação e informações adicionais, sempre que possível, devido às limitações inerentes à citogenética de interfase e às sondas de DNA.
Mensagem chave
A interfase FISH no sangue, nas células bucais e na urina é um método rápido, eficaz e não invasivo para o diagnóstico da aneuploidia cromossômica.
Reconhecimento
Os autores agradecem ao professor Mariano Rocchi (Universidade de Bari, Itália) pelos recursos sobre citogenética molecular (clones de plasmídeos para os cromossomos 1 e 18). Agradecemos também ao Dr. J Pahi (ex-residente sênior) e ao Sr. Ramsaran (diretor técnico, citogenética) do Departamento de Genética Médica, por fornecer vários atendimentos durante o estudo.
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