No presente estudo, os seguintes parâmetros foram avaliados nos eritrócitos e plasma para elucidar o estado oxidante-antioxidante em pacientes com doença arterial coronariana. Os níveis de malondialdeído eritrocitário (MDA) foram medidos como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que servem como um índice da extensão da peroxidação lipídica. A glutationa dos eritrócitos (GSH), o ácido ascórbico e a vitamina E plasmática servem como parâmetros antioxidantes não enzimáticos. Foram estimadas as atividades de enzimas antioxidantes, superóxido dismutase (SOD), catalase, glutationa peroxidase (GPX) em eritrócitos, glutationa-S-transferase (GST) no plasma e níveis séricos de homocisteína. A GST é uma enzima envolvida na defesa antioxidante e também está envolvida na desintoxicação.
Material e métodos
Sessenta e cinco pacientes com diagnóstico clínico de infarto agudo do miocárdio, internados na Unidade de Cuidados Intensivos Cardíacos (ICCU), foram escolhidos para o estudo. Os pacientes foram selecionados aleatoriamente e compareceram para avaliação cardíaca em setembro de 2006 e dezembro de 2007. Um número igual de idade e sexo pareados com indivíduos saudáveis com status socioeconômico semelhante também foi investigado. As fêmeas do grupo de estudo foram pareadas com fêmeas do grupo controle.
Critérios diagnósticos dos pacientes
O diagnóstico de infarto agudo do miocárdio foi baseado nos critérios da OMS, que exigiram a presença de pelo menos dois dos três elementos a seguir: i) tipo de dor torácica isquêmica; ii) alterações nos traçados seriados do ECG; marcador (CKMB) (10) .
Critério de exclusão
Os pacientes com insuficiência renal associada, doença hepática, doença pulmonar, gravidez, doença da tireóide, doença gastrointestinal e aqueles que tomam metotrexato, carbamazepina ou fenitoína, que poderiam alterar os parâmetros necessários, foram excluídos do estudo. Nenhum paciente sofreu infarto do miocárdio dentro de 6 meses antes de participar do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo, e os objetivos do estudo foram totalmente explicados.
Havia dois grupos de estudo. Os controles e pacientes foram divididos em dois grupos.
Grupo 1: Sessenta e cinco controles de idade e sexo saudáveis.
Grupo 2: Sessenta e cinco pacientes com doença arterial coronariana diagnosticada clinicamente.
Amostras de sangue retiradas de todos os sujeitos dentro de uma hora da admissão foram processadas para as enzimas cardíacas (CK, CK-MB, LDH). As amostras de sangue venoso heparinizado obtidas em condições assépticas desses sujeitos em jejum (após jejum noturno) foram utilizadas para a análise da homocisteína. O plasma foi separado por centrifugação a 1 000 g durante 15 minutos. O plasma separado foi utilizado para a estimativa da vitamina E e para a medição da atividade da GST. Todos os casos foram submetidos a investigações de rotina, como hematócrito, análise de urina e química do sangue (eletrólitos, lipídios, glicemia, uréia e creatinina). Colesterol sérico elevado e triglicerídeos, juntamente com baixos níveis de HDL, são observados nesses pacientes. A camada leucoplaquetária foi removida e as células empacotadas foram lavadas três vezes com solução salina fisiológica.(11) , modificado por Quist (12) . Os concentrados foram utilizados para a análise de GSH, ácido ascórbico, MDA, SOD, Catalase e GPX. O Eritrócito GSH foi estimado pelo método de Beutler et al (13) , utilizando o ácido Di Tio Bis Nitro Benzoico (DTNB). Os níveis de ácido ascórbico foram estimados pelo método de Tietz (14) . Os níveis plasmáticos de vitamina E foram estimados pelo método de Baker H et al (15) . O MDA foi determinado como a medida do TBARS (16) . Determinou-se a actividade SOD (EC 1.15.1.1) no hemolisado pelo método de Misra e Fridovich, com base na inibição da auto-oxidação da epinefrina em adenocromo em Ph 10.2 (17). A atividade da catalase (EC 1.11.1.6) foi medida pelo método de Beers e Sizer (18) . A atividade da Glutationa Peroxidase (GPX, EC 1.11.1.9) foi medida conforme descrito por Paglia e Valentine (19) em eritrócitos, e a atividade da GST (EC 2.5.1.18) foi medida usando 1-Cloro-2, 4-Dinitro. Benzeno (CDNB) (20) . A homocisteína foi medida usando um sistema de imunoensaio em fase sólida, que mede a homocisteína total no plasma ou soro usando um kit BioRad (21) .
Produtos químicos
Todos os reagentes utilizados foram de grau analítico de reagente. DTNB, CDNB e Thio Barbituric Acid foram obtidos da Sigma Chemicals, St.Louis; MO
Análise Estatística
A análise estatística entre o grupo 1 (controles) e o grupo 2 (pacientes) foi realizada pelo teste U de Mann Whitney. Os dados foram expressos como média + DP. P <0,05 foi considerado significativo.
Resultados
As características básicas dos pacientes com doença arterial coronariana e controles são dadas em (Tabela / Fig. 1) .
A média +/- DP de GSH de eritrócito, ácido ascórbico, MDA, SOD, Catalase, GPx, vitamina E plasmática, GST plasmática e homocisteína sérica em pacientes com doença arterial coronariana e controles estão indicados na (Tabela / Fig. 2) .
Houve um aumento estatisticamente significativo no MDA dos eritrócitos e nos níveis séricos de homocisteína em pacientes com Doença Arterial Coronariana, em comparação aos controles. As atividades das enzimas antioxidantes dos eritrócitos, SOD, GPX e GST plasmática foram significativamente aumentadas no grupo 2 (indivíduos do estudo) em comparação com o grupo 1 (controles). Os níveis de GSH no eritrócito, ácido ascórbico, vitamina E plasmática e atividade da catalase foram significativamente menores em pacientes com doença arterial coronariana em comparação aos controles.
Discussão
No presente estudo, o produto de peroxidação lipídica, ou seja, os níveis de MDA, aumentaram significativamente nos eritrócitos dos pacientes com Doença Arterial Coronariana em comparação aos controles. MDA é um produto de decomposição da auto-oxidação de ácidos graxos poli insaturados, que é usado como um índice de dano oxidativo (22). O aumento na concentração de MDA indica aumento da peroxidação lipídica da membrana, caracterizada por hiperlipidemia, especificamente hipercolesterolemia, nesses pacientes. O aumento do MDA pode ser devido ao aumento da geração de espécies reativas de oxigênio (EROs), devido ao excessivo dano oxidativo gerado nesses pacientes. Essas espécies de oxigênio, por sua vez, podem oxidar muitas outras biomoléculas importantes, incluindo lipídios de membrana. Relatos similares de níveis elevados de MDA foram relatados em pacientes com doença arterial coronariana (4) .
Observamos uma diminuição significativa nos níveis de glutationa eritrocitária (GSH), ácido ascórbico e vitamina E plasmática (sistema de defesa antioxidante não enzimático) em pacientes com doença arterial coronariana, quando comparados aos controles. A diminuição nos níveis desses parâmetros antioxidantes não enzimáticos pode ser devida ao aumento do turnover, para prevenir danos oxidativos nesses pacientes, sugerindo um aumento na defesa contra o dano oxidativo na doença arterial coronariana. Alguns outros grupos também relataram níveis diminuídos de GSH, ácido ascórbico e vitamina E em pacientes com doença arterial coronariana (23) .
Em nosso estudo, as atividades das enzimas antioxidantes dos eritrócitos, ou seja, SOD e GP, aumentaram significativamente em pacientes com doença arterial coronariana, em comparação aos controles. A SOD é uma importante enzima antioxidante que possui um efeito antitóxico contra o ânion superóxido. A superexpressão de SOD pode ser uma resposta adaptativa e resulta em aumento da dismutação do superóxido em peróxido de hidrogênio. Há uma produção aumentada de ânions de superóxido por células isquêmicas. Em contraste com o nosso estudo, foram relatadas concentrações diminuídas de SOD no hemolisado desses pacientes (4). GPX, uma enzima indutível por stress oxidativo, desempenha um papel significativo no mecanismo de eliminação de peroxil e na manutenção da integração funcional das membranas celulares. O aumento da atividade da GPX pode ser devido à sua indução para contrariar o efeito do aumento do estresse oxidativo.
A glutationa - S - transferase é um grupo de proteínas multifuncionais, que desempenha um papel central na desintoxicação de substâncias químicas eletrofílicas e na remoção hepática de compostos hidrofóbicos potencialmente prejudiciais do sangue (24) . Nós observamos um aumento significativo na atividade da GST em pacientes com doença arterial coronariana, em comparação com controles. O aumento na atividade da GST pode ser devido à sua indução para contrariar o efeito contra o aumento do estresse oxidativo.
No presente estudo, observamos uma diminuição significativa na atividade da catalase em pacientes com doença arterial coronariana, em comparação aos controles. Catalase é a enzima que protege as células do acúmulo de peróxido de hidrogênio, dismutando-o para formar água e oxigênio, ou usando-o como um oxidante no qual ele funciona como uma peroxidase.
A homocisteína tem sido reconhecida recentemente como um fator de risco para doenças vasculares. Em nosso estudo, os níveis séricos de homocisteína foram significativamente aumentados em pacientes com DAC, em comparação com controles. O aumento dos níveis séricos de homocisteína também leva à formação de placas ateroscleróticas, que acabam levando ao infarto do miocárdio. Os grupos sulfidrila na homocisteína foram oxidados em dissulfeto, catalisados pelos metais de transição, pelos quais várias espécies reativas de oxigênio e hidroperóxidos foram produzidos, e inicia a peroxidação lipídica, responsável pela lesão endotelial (25) . Relatos similares de aumento dos níveis de homocisteína na doença arterial coronariana foram relatados (26) .
Conclusão
Em conclusão, o estresse oxidativo pode estar envolvido na doença arterial coronariana. Os resultados do nosso estudo mostraram maior produção de radicais livres de oxigênio e diminuição da atividade da catalase, sugerindo a incidência de estresse oxidativo na doença arterial coronariana. O aumento das atividades das enzimas antioxidantes pode ser uma regulação compensatória em resposta ao aumento do estresse oxidativo. O aumento dos níveis de homocisteína e a diminuição da capacidade antioxidante podem contribuir para o aumento do risco de doença cardiovascular em pacientes com doença arterial coronariana, além de fatores de risco conhecidos como idade, sexo, dislipidemia, pressão arterial e tabagismo. Assim, o tratamento com antioxidantes no manejo da doença arterial coronariana pode ser útil como terapia secundária para prevenir danos oxidativos.